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1976年6月29日，马伊琍出生于上海市虹口区。15岁时，马伊琍参加上海电视台的综艺舞蹈队，正式自食其力自己赚取学费。
1993年，马伊琍被选中主演电影《刘海粟》，那是她的第一次触电经历，收获800元片酬。
1994年，马伊琍考入上海戏剧学院94级表演系本科。
1996年，在电视剧《真空爱情记录》中饰演夏文心，讲述了一群大学毕业生为了工作和爱情奋斗的故事。
1998年，毕业于上海戏剧学院，毕业后参演了第一部改编自陕西驻沪作家李春平同名小说的电影《玻璃是透明的》，马伊琍饰演“小丫子”，同年出演的第一部古装电影《孔乙己》至今没有公映。
2000年，出演了《黑洞》饰演三陪女，马伊琍的表演事业得到了更好的提升，在电视剧《前世今生》中饰演美貌且气质超凡的秦婉莹。
2001年，出演电视剧《白天睡觉的女人》饰演李秀，在电影《西施眼》中饰演施雨，该剧在2002年美国夏威夷国际电影节中获评审团大将及亚洲最佳电影。
2002年，因出演电视剧《还珠格格Ⅲ之天上人间》中夏紫薇一角而被大众所熟知。
2004年，出演了由黄磊指导的《天一生水》饰演一个混血姑娘明妮。
2005年，出演张黎导演的电视剧《锦衣卫》在剧中就出演了一个这样的倾国美人客印月。
2006年，参演《乔家大院》扮演的“江雪瑛”。
2007年，出演由赵宝刚指导的青春励志电视剧《奋斗》夏琳一角而知名度得到进一步的提升。
2008年，因拍电视剧《为谁心动》时无悔剃光了头，凭借影片《江北好人》，马伊琍战胜了李冰冰、范冰冰两位大热候选人，成为了长春电影节影后。
2009年，与佟大为共同出演了电视剧《婚姻保卫战》演出夫妻间事。同年马伊琍出演了首部反映豫商故事的电视剧《经纬天地》在CCTV-8播出，这也是她继《乔家大院》之后首次登陆央视，马伊琍扮演尚达志的妻子顺儿，这也是马伊琍生产复出首部电视剧作品。
2010年，与涂松岩领衔主演的都市题材电视剧《双城生活》反映了“双城恋”话题，让许多观众产生了不小共鸣并引发了网络热议，而马伊琍在剧中饰演北京大妞郝京妮。凭借该剧获得国剧盛典2011年度最佳女演员。
2013年，年初马伊琍与杜淳、刘莉莉、陈思斯等众多明星合作电视剧《青春期撞上更年期Ⅱ》，此外，还客串电影《不二神探》，并且彻底颠覆以往的形象。2013年，首当制片人的马伊琍与首次当导演的丈夫文章合作的电视剧《小爸爸》。
2015年，出演了公路犯罪片《未择之路》。电视剧《北上广不相信眼泪》于11月7日在北京卫视、浙江卫视播出；7月16日，参演的民国时期战争题材作品《那些女人》正式杀青。
2016年，与陈建斌领衔主演的当代都市幽默轻喜剧《中国式关系》于在北京杀青。4月，在文章执导的谍战剧《剃刀边缘》中饰演女主角。
2017年，主演都市情感剧《我的前半生》，在剧中饰演罗子君，凭借该剧获得第24届上海电视节“白玉兰奖”最佳女主角。
2018年，凭借电影《那些女人》获得第21届上海国际电影节电影频道传媒关注单元最佳女配角奖；9月14日，其主演的犯罪电影《未择之路》上映，片中饰演一名卡车司机小眉；9月30日，与姚晨共同主演的剧情片《找到你》上映。
2019年，与高伟光主演的民国探案剧《爱思小姐探案集》在横店开机，在剧中饰演了法租界警务局中央巡捕房探员苏雯丽；4月26日，凭借电影《找到你》获得第10届中国电影导演协会年度女演员奖；6月12日，凭借电影《找到你》获得第25届华鼎奖中国电影最佳女主角；6月，将担任第25届上海电视节白玉兰奖电视剧类别中国电视剧单元评委；9月22日，与刘烨合作主演的都市创业剧《在远方》播出；10月22日，凭借电影《找到你》提名第32届中国电影金鸡奖最佳女主角；11月，主演由薛晓路执导的职场现实题材剧《在不安的世界安静地活》，在剧中饰演林墨。
2020年，与高伟光主演的民国探案剧《旗袍美探》播出。
旗袍美探2020-8-28饰演苏雯丽导演邓科主演高伟光、董璇、卜冠今、吴昊宸
在远方2019-09-22饰演路晓欧导演陈昆晖主演刘烨、梅婷、保剑锋、曾黎
我的前半生2017-07-04饰演罗子君导演沈严主演靳东、袁泉、雷佳音、吴越
剃刀边缘2017-03-20饰演关海丹导演文章主演文章、丁勇岱、芦芳生、栾元晖
中国式关系2016-09-07饰演江一楠导演沈严主演陈建斌、赵立新、胡可、叶一云
北上广不相信眼泪2015-11-07饰演潘芸导演李骏主演朱亚文、张兆辉、张可颐、侯京健
小爸爸2013-09-02饰演李三妹导演文章主演文章、王耀庆、朱佳煜、刘欢
青春期撞上更年期Ⅱ2013-03-06饰演贺飞儿导演庞好主演杜淳、曹炳琨、董璇、刘莉莉
风和日丽2012-03-28饰演杨小翼导演杨文军主演李晨、刘芸、尤勇、陶慧敏
双城生活2011-07-20饰演郝京妮导演安建主演涂松岩、张小磊、岳红、商忆莎
青春期撞上更年期2010-12-15饰演贺飞儿导演庞好主演杜淳、董璇、曹炳琨、刘莉莉
经纬天地2010-08-17饰演梁顺儿导演黄健中主演贾一平、周扬、张光北、田野
婚姻保卫战2010-08-16饰演李梅导演赵宝刚、王迎主演佟大为、黄磊、袁立、于娜
二哥2009-10-01饰演苏教授女儿导演梁天主演洪剑涛、曹艳艳、杨明娜、马崇乐
锁春记2008-11-23饰演庄芷言导演黄文利、郝琳主演于和伟、咏梅、甘婷婷、康英
美丽无声2008-10-06饰演阿菊导演黄健中主演王姬、陈龙、杨昆、惠娟艳
幸福在哪里2007-09-21饰演齐若谷导演王雷主演贾一平、张博、白百何、徐秀琳
永远的铭记2007-09-01饰演沈璇青导演刘新主演蓝正龙、金鑫、午马、万美汐
奋斗2007-05-17饰演夏琳导演赵宝刚、王迎主演佟大为、李小璐、文章、王珞丹
别说爱情苦2007-6-29饰演俞青地导演李路主演孙玮、肖荣生、陈锦鸿、王钏如
锦衣卫2006-10-23饰演郑贵妃导演张黎主演谭凯、文章、黄志忠、刘文治
月牙儿与阳光2006-05-20饰演张小月导演霍庄、徐晓星主演伊春德、黄磊、江珊、寇振海
酒巷深深2006-04-03饰演古雨导演郭宝昌主演邵兵、朱媛媛、王虎城、关大心
乔家大院2006-02-13饰演江雪瑛导演胡玫主演陈建斌、蒋勤勤、倪大红、雷恪生
碧海深沉2006饰演友情演出导演何燕江主演彭丹、丁军、马少骅、张世
五妹2005-09-10饰演五妹导演刘新主演王新军、奚美娟、刘艺、高宝宝
天一生水2005-06-25饰演林若云导演黄磊、韩魏主演黄磊、范冰冰、耿乐、李解
七武士2004-01-23饰演梅小瑶导演刘海波主演邵峰、孙耀威、王艳、何赛飞
七日2003-10-01饰演邵静然导演管虎、王熠主演黄磊、耿乐、池华琼、成泰燊
谁都会说我爱你2003-09-21饰演林菊若导演丽珍主演李亚鹏、秦海璐、郭晓冬、陈佳妍
我和我的祖国2019-09-30饰演小美（成年）导演陈凯歌、徐峥主演吴京、刘涛、徐峥、段博文
进京城2019-05-10饰演凤格格导演胡玫主演富大龙、马敬涵、王子文、姚安濂
找到你2018-09-30饰演孙芳导演吕乐主演姚晨、袁文康、吴昊宸、王梓尘
未择之路2018-09-14饰演小眉导演唐高鹏主演王学兵、朱耕佑、王旭峰、文章
那些女人2018-09-03饰演江家娘娘导演江平主演何赛飞、胡可、殷桃、周冬雨
不二神探2013-6-21饰演警局高级长官导演王子鸣主演文章、李连杰、刘诗诗、陈妍希
寒战2012-11-8饰演刘杰辉太太导演梁乐民、陆剑青主演郭富城、梁家辉、杨采妮、李治廷
失恋33天2011-11-8饰演分手女孩B导演滕华涛主演文章、白百何、张嘉译、王耀庆
跟踪孔令学2011-4-30饰演杨秋月导演张骁主演范伟、孙宁、白卉子、支一
江北好人2007-10-19饰演赵小芸导演刘新主演夏雨、马军勤、苗圃、江珊
危情雪夜2004-2-20饰演苏宝导演陈国星主演陶泽如、吴越、高明、何冰
西施眼2002-9-27饰演施雨导演管虎主演黄依群、杨倩倩、王传君、刘巨勇
一见钟情2002饰演橘子导演夏钢、孟朱主演陆毅、范冰冰、海清、雪村
聊斋·席方平2000饰演杜玉翠导演谢铁骊、杜民主演沙溢、席与立、谢钢、李法曾
玻璃是透明的1999饰演小丫子导演夏钢主演黄凯、许晓丹、马仑、王珏
孔乙己1999饰演宋含玉主演郭昊伦
2018第21届上海国际电影节-电影频道传媒大奖最受传媒关注女配角奖那些女人（获奖）
2018第21届上海国际电影节-电影频道传媒大奖最受传媒关注女主角奖进京城（提名）
2019第32届中国电影金鸡奖最佳女主角奖找到你（提名）
2019第11届澳门国际电影节最佳女主角奖未择之路（提名）
2018第10届澳门国际电影节最佳女主角奖进京城（提名）
2008第9届中国长春电影节-金鹿奖最佳女主角奖江北好人（获奖）
2019第10届中国电影导演协会年度女演员奖找到你（获奖）
2020第26届上海电视节-白玉兰奖最佳女主角奖在远方（提名）
2018第24届上海电视节-白玉兰奖最佳女主角奖我的前半生（获奖）
2017第23届上海电视节-白玉兰奖最佳女主角奖中国式关系（提名）
2006第23届中国电视金鹰奖观众喜爱的女演员奖乔家大院（提名）
2011第1届亚洲彩虹奖最佳女喜剧演员奖婚姻保卫战（获奖）
2008第15届北京大学生电影节最佳女主角奖江北好人（提名）
2019第17届中国电影表演艺术学会金凤凰奖学会奖（获奖）
2009第12届中国电影表演艺术学会金凤凰奖学会奖江北好人（获奖）
2019-06第25届华鼎奖中国电影最佳女主角找到你（获奖）
2018-09第75届威尼斯国际电影节-“聚焦中国”单元焦点女演员奖未择之路（获奖）
2011-11第3届英国万像国际华语电影节最佳女配角奖跟踪孔令学（获奖）
2009-03第2届华鼎奖中国年度影视表现最佳女演员奖江北好人（获奖）
2017-10第4届横店影视文荣奖最佳女主角我的前半生（获奖）
2016-05第19届华鼎奖中国百强电视剧最佳女主角北上广不相信眼泪（获奖）
2019新时代国际电视节建国70周年全国十佳电视剧女演员（提名）
20182017国剧盛典年度实力剧星（获奖）
2013“CCTV2012中国电视剧年度明星盛典”特别突破奖女演员奖（获奖）
2012“CCTV2012中国电视剧年度明星盛典”特别突破奖女演员奖（获奖）
2011爱奇艺2012年度盛典“年度最佳电视剧女演员”（获奖）
2011优酷影视指数盛典“开年优酷指数最佳女演员奖”（获奖）
2011“国剧盛典”年度最佳女主角双城生活（获奖）
2011“大剧盛典”获得“开年网络指数最佳女演员奖”（获奖）
2010《申江服务导报》-永华电影盛宴“年度影视剧红人女演员”（获奖）
2010《北京青年周刊》BQ红人榜“年度人气女演员奖”（获奖）
2010腾讯星光大典获“年度电视女演员”（获奖）
20092008风尚权利榜“最受欢迎女演员奖”（获奖）
2012“优品中国文化行”大使（获奖）
2012“星尚大典”星尚演绎先锋人物（获奖）
2011“2011中国最美50人盛典”获得“温暖之美”大奖（获奖）
2011“中国影响2010·时尚盛典”最美‧年度“荧屏情侣”(马伊琍、佟大为)（获奖）
2010南方时尚盛典“最受公众关注中国时尚明星”（获奖）
2009“中国国际年度绿色风云人物”奖（获奖）
2008大爱时尚盛典“精品大爱之星奖”（获奖）
2007CCTV少儿频道欢乐盛典“最具奋斗精神奖”（获奖）
2007第四届“COSMOBEAUTYAWARDS”获“年度最佳造型奖”（获奖）
2007《北京青年周刊》BQ红人榜“艺术红人奖”（获奖）
2006腾讯网“娱乐中国·2006星光大典”最受欢迎四大花旦(与黄奕、李小冉、刘烨)（获奖）
我这个人婚前很擅长主外，婚后就开始慢慢学会主内，现在我是内外兼修的婚姻选手。我结婚前比较“大女人”一些，但与文章婚后，学会了在外“大女人”，在家“小女人”。（自评）
这个角色让马伊琍充分展示了极宽的戏路。（赵宝刚评）
她是好演员的代表。（朱亚文评）
